C18色譜柱因鍵合方式的不同│◕₪₪•、粒徑的不同│◕₪₪•、長度的不同✘│,內徑的差異等多方面因素✘│,呈現出不同選擇性◕↟◕。這樣✘│,在市場上就出現了數百種具有不同分離選擇特性的C18色譜柱◕↟◕。
對於傳統的C18色譜柱✘│,pH值使用範圍通常為2~7✘│,因為pH值高於8時C18固定相會受到限制◕↟◕。由於殘餘矽羥基的存在✘│,易對鹼性化合物造成不可逆吸附✘│,造成峰拖尾✘│,影響分離與分析◕↟◕。pH值太低則會使鍵合的烷基脫落✘│,而且對成分的分離達不到要求◕↟◕。
1│◕₪₪•、酸性條件下C18的選擇
為了改善C18色譜柱在低pH值時的穩定性✘│,有人提出了空間位阻方法◕↟◕。
空間位阻作用是指連線較大基團✘│,立體阻礙溶質基團進攻矽醇基✘│,使矽氧烷能夠再生✘│,提高了化學鍵合固定相抗水解的能力◕↟◕。
還有人制備了側鏈中含有異丙基或異丁基的C18化學鍵合固定相◕↟◕。該固定相由於引入了較大的側鏈基團✘│,立體阻礙了殘留矽醇基與溶質之間的相互作用✘│,在低pH值條件下能夠保持穩定✘│,這種化學鍵合固定相更適合酸性物質的分離◕↟◕。
Zorbax Stable Bond C18色譜柱就使用了空間位阻技術✘│,其使用單官能團矽烷✘│,具有較大的二異丁基(SB-C18)側鏈基團✘│,空間位阻關鍵的矽氧烷鍵合到矽膠表面✘│,以避免在低pH值條件下水解破壞✘│,在酸性流動相條件下提供良好的穩定性和重現性◕↟◕。因此✘│,Stable Bond色譜柱成為低pH值方法開發的很好的選擇◕↟◕。在方法開發初期✘│,若選定流動相為酸性✘│,可將此類色譜柱作為很好的選擇◕↟◕。
2│◕₪₪•、鹼性條件下C18的選擇
製造快速分離鹼性化合物的化學鍵合相一直是研究熱點◕↟◕。
雙齒鍵合固定相的每個矽烷化分子中含有兩個矽原子✘│,兩個矽原子之間以-O-或-CH2-CH2等基團連線✘│,每個矽原子含有1個C18官能團◕↟◕。它的環狀結構無論在低pH值條件下✘│,還是高pH值條件下均顯示了較高的穩定性和滿意的柱效◕↟◕。
與傳統的單齒化學鍵合相相比✘│,這種化學鍵合固定相突出的優點是在低│◕₪₪•、中│◕₪₪•、高pH值時都有很好的穩定性◕↟◕。使用C18雙齒化學鍵合固定相的商品柱有Zorbax Extend-C18色譜柱✘│,其耐受pH值達11.5✘│,特別適合在高pH值的流動相條件下對強鹼性化合物進行有效的色譜分離◕↟◕。