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液相色譜儀的用途及三大系統介紹

釋出時間│▩│:2021-12-20        閱讀│▩│:2526
液相色譜儀根據固定相是液體或是固體·•↟▩,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)☁▩▩。現代液相色譜儀由高壓輸液泵╃☁·↟₪、進樣系統╃☁·↟₪、溫度控制系統╃☁·↟₪、色譜柱╃☁·↟₪、檢測器╃☁·↟₪、訊號記錄系統等部分組成☁▩▩。與經典液相柱色譜裝置比較·•↟▩,具有高效╃☁·↟₪、快速╃☁·↟₪、靈敏等特點☁▩▩。對高沸點╃☁·↟₪、難氣化合物的混合物透過色譜柱核淋洗劑並以實現分離☁▩▩。應用於生物化學╃☁·↟₪、生物醫學╃☁·↟₪、環境化學╃☁·↟₪、石油化工等部門☁▩▩。

高效液相色譜儀主要有進樣系統╃☁·↟₪、輸液系統╃☁·↟₪、分離系統╃☁·↟₪、檢測系統和資料處理系統·•↟▩,下面將分別敘述其各自的組成與特點☁▩▩。

 

  1.進樣系統

  液相色譜儀一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作·•↟▩,進樣量是恆定的☁▩▩。這對提高分析樣品的重複性是有益的☁▩▩。

  

  2.輸液系統

  該系統包括高壓泵╃☁·↟₪、流動相貯存器和梯度儀三部分☁▩▩。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa·•↟▩,流速可調且穩定·•↟▩,當高壓流動相透過層析柱時·•↟▩,可降低樣品在柱中的擴散效應·•↟▩,可加快其在柱中的移動速度·•↟▩,這對提高解析度╃☁·↟₪、回收樣品╃☁·↟₪、保持樣品的生物活性等都是有利的☁▩▩。流動相貯存器和梯度儀·•↟▩,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變·•↟▩,包括改變洗脫液的極性╃☁·↟₪、離子強度╃☁·↟₪、PH值·•↟▩,或改用競爭性抑制劑或變性劑等☁▩▩。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離☁▩▩。


  3.分離系統

  該系統包括色譜柱╃☁·↟₪、連線管和恆溫器等☁▩▩。色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時·•↟▩,可在二者之間加一連線管)·•↟▩,內徑為2~5mm·•↟▩,由"優質不鏽鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成·•↟▩,住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質和固定液構成).固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或矽膠構成·•↟▩,它們都有惰性(如矽膠表面的矽酸基因基本已除去)╃☁·↟₪、多孔性(孔徑可達1000)和比表面積大的特點·•↟▩,加之其表面經過機械塗漬(與氣相色譜中固定相的製備一樣)·•↟▩,或者用化學法偶聯各種基因(如磷酸基╃☁·↟₪、季胺基╃☁·↟₪、羥甲基╃☁·↟₪、苯基╃☁·↟₪、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物☁▩▩。因此·•↟▩,這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性☁▩▩。例如·•↟▩,在多孔性矽膠表面偶聯豌豆凝集素(PSA)後·•↟▩,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來☁▩▩。另外·•↟▩,固定相基質粒小·•↟▩,柱床極易達到均勻╃☁·↟₪、緻密狀態·•↟▩,極易降低渦流擴散效應☁▩▩。基質粒度小·•↟▩,微孔淺·•↟▩,樣品在微孔區內傳質短☁▩▩。這些對縮小譜頻寬度╃☁·↟₪、提高解析度是有益的☁▩▩。根據柱效理論分析·•↟▩,基質粒度小·•↟▩,塔板理論數N就越大☁▩▩。這也進一步證明基質粒度小·•↟▩,會提高解析度的道理☁▩▩。再者·•↟▩,高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60C·•↟▩,透過改善傳質速度·•↟▩,縮短分析時間·•↟▩,就可增加層析柱的效率☁▩▩。

 

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