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液相色譜分析柱在使用前和使用時都注意些▩│✘↟,可避免麻煩

釋出時間◕│₪↟:2021-11-03        閱讀◕│₪↟:625
  現在流行兩種主要的液相色譜分析柱的式樣▩│✘↟,關鍵部件卡套有些不同☁·╃│•。一種式樣是螺母☁₪、卡套全套在柱管上▩│✘↟,分配器和燒結過濾板按順序放在尾部接頭內☁·╃│•。擰緊螺母和尾部接頭▩│✘↟,卡套一次成型緊緊咬住柱管外壁▩│✘↟,起到很好的密封作用☁·╃│•。分配器使得高壓流動相不集中在一點衝擊柱床▩│✘↟,又能把由流動相帶來的樣品分散到柱頭上均勻分離▩│✘↟,形成對稱的色譜峰☁·╃│•。燒結過濾板的孔徑<5微米▩│✘↟,除了能緩和高壓流動相對固定相的衝擊▩│✘↟,也擋住了汙染物進入色譜柱柱頭☁·╃│•。
 
  液相色譜分析柱在使用前▩│✘↟,需要進行柱的效能測試▩│✘↟,並將結果儲存起來▩│✘↟,作為今後評價柱效能變化的參考☁·╃│•。但要注意◕│₪↟:柱效能可能由於所使用的樣品☁₪、流動相☁₪、柱溫等條件的差異而有所不同;另外▩│✘↟,在做柱效能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是好的條件)▩│✘↟,只有這樣▩│✘↟,測得的結果才有可比性☁·╃│•。具體有以下3點◕│₪↟:
 
  1☁₪、樣品的前處理◕│₪↟:
 
  a☁₪、至好使用流動相溶解樣品☁·╃│•。
 
  b☁₪、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質☁·╃│•。
 
  c☁₪、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質☁·╃│•。
 
  2☁₪、流動相的配製◕│₪↟:
 
  a☁₪、流動相對樣品具有一定的溶解能力▩│✘↟,保證樣品組分不會沉澱在柱中(或長時間保留在柱中)☁·╃│•。
 
  b☁₪、流動相具有一定惰性▩│✘↟,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)☁·╃│•。
 
  c☁₪、流動相的黏度要儘量小▩│✘↟,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降▩│✘↟,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)☁·╃│•。
 
  3☁₪、流動相流速的選擇◕│₪↟:
 
  因液相色譜分析柱是柱中流動相線性流速的函式▩│✘↟,使用不同的流速可得到不同的柱效☁·╃│•。對於一根特定的色譜柱▩│✘↟,要追求更好的柱效▩│✘↟,使用合適流速☁·╃│•。對內徑為4.6mm的色譜柱▩│✘↟,流速一般選擇1ml/min▩│✘↟,對於內徑為4.0mm柱▩│✘↟,流速0.8ml/min為佳☁·╃│•。
 
  在使用液相色譜分析柱時▩│✘↟,多注意使用注意事項可以避免一些不必要的麻煩▩│✘↟,進而提高實驗人員的工作效率▩│✘↟,比較主要的有以下6點◕│₪↟:
 
  1☁₪、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)▩│✘↟,以避免固定相被破壞☁·╃│•。
 
  有時可以在進樣器前面連線一預柱▩│✘↟,分析柱是鍵合矽膠時▩│✘↟,預柱為矽膠▩│✘↟,可使流動相在進入分析柱之前預先被矽膠“飽和”▩│✘↟,避免分析柱中的矽膠基質被溶解☁·╃│•。
 
  2☁₪、經常用強溶劑沖洗色譜柱▩│✘↟,清除保留在柱內的雜質☁·╃│•。
 
  在進行清洗時▩│✘↟,對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡▩│✘↟,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右☁·╃│•。
 
  3☁₪、儲存色譜柱
 
  應將柱內充滿乙腈或甲醇▩│✘↟,柱接頭要擰緊▩│✘↟,防止溶劑揮發乾燥☁·╃│•。絕對禁止將緩衝溶液留在柱內靜置過夜或更長時間☁·╃│•。
 
  4☁₪、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動
 
  溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料▩│✘↟,因此▩│✘↟,在調節流速時應該緩慢進行▩│✘↟,在閥進樣時閥的轉動不能過緩☁·╃│•。
 
  5☁₪、應逐漸改變溶劑的組成
 
  特別是反相色譜中▩│✘↟,不應直接從有機溶劑改變為全部是水▩│✘↟,反之亦然☁·╃│•。
 
  6☁₪、一般說來色譜柱不能反衝
 
  只有生產者指明該柱可以反衝時▩│✘↟,才可以反衝除去留在柱頭的雜質☁·╃│•。否則反衝會迅速降低柱效☁·╃│•。
 

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