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原來高效液相色譜系統是由這五個系統組合而成的

釋出時間╃↟:2020-07-30        閱讀╃↟:891
  高效液相色譜系統主要有進樣系統·✘▩、資料處理系統·✘▩、輸液系統·✘▩、檢測系統和分離系統·│₪☁•。
 
  1·✘▩、進樣系統╃↟:一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作✘•·,進樣量是恆定的·│₪☁•。這對提高分析樣品的重複性是有益的·│₪☁•。
 
  2·✘▩、資料處理系統╃↟:該系統可對測試資料進行採集·✘▩、貯存·✘▩、顯示·✘▩、列印和處理等操作✘•·,使樣品的分離·✘▩、製備或鑑定工作能正確開展·│₪☁•。

  3·✘▩、高效液相色譜系統中輸液系統╃↟:該系統包括高壓泵·✘▩、流動相貯存器和梯度儀三部分·│₪☁•。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4x107pa✘•·,流速可調且穩定✘•·,當高壓流動相透過層析柱時✘•·,可降低樣品在柱中的擴散效應✘•·,可加快其在柱中的移動速度✘•·,這對提高解析度·✘▩、回收樣品·✘▩、保持樣品的生物活性等都是有利的·│₪☁•。流動相貯存錯和梯度儀✘•·,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變✘•·,包括改變洗脫液的極性·✘▩、離子強度·✘▩、ph值✘•·,或改用競爭性抑制劑或變性劑等·│₪☁•。這就可使各種物質都能獲得有效分離·│₪☁•。
 
  4·✘▩、檢測系統╃↟:高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器·✘▩、示差折光檢測器和熒光檢測器三種·│₪☁•。
  a·✘▩、紫外檢測器 該檢測器適用於對紫外光(或可見光)有吸收效能樣品的檢測·│₪☁•。其特點╃↟:使用面廣;靈敏度高;線性範圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品·│₪☁•。
  b·✘▩、示差折光檢測器 凡具有與流動相折光率不同的樣品組分✘•·,均可使用示差折光檢測器檢測·│₪☁•。目前✘•·,糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統·│₪☁•。這一系統通用性強·✘▩、操作簡單✘•·,但靈敏度低(檢測下限為10-7g/ml)✘•·,流動相的變化會引起折光率的變化✘•·,因此✘•·,它既不適用於痕量分析✘•·,也不適用於梯度洗脫樣品的檢測·│₪☁•。
  c·✘▩、熒光檢測器 凡具有熒光的物質✘•·,在一定條件下✘•·,其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比·│₪☁•。因此✘•·,這一檢測器只適用於具有熒光的有機化合物的測定✘•·,其靈敏度很高✘•·,痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可採用·│₪☁•。
 
  5·✘▩、分離系統╃↟:該系統包括色譜柱·✘▩、連線管和恆溫器等·│₪☁•。色譜柱一般長度為10~50cm✘•·,內徑為2~5mm✘•·,由不鏽鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成✘•·,住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相·│₪☁•。固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或矽膠構成✘•·,它們都有惰性·✘▩、多孔性和比表面積大的特點✘•·,加之其表面經過機械塗漬✘•·,或者用化學法偶聯各種基因或配體的有機化合物·│₪☁•。因此✘•·,這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性·│₪☁•。例如✘•·,在多孔性矽膠表面偶聯豌豆凝集素(psa)後✘•·,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來·│₪☁•。 
  另外✘•·,固定相基質粒小✘•·,柱床極易達到均勻·✘▩、緻密狀態✘•·,極易降低渦流擴散效應·│₪☁•。基質粒度小✘•·,微孔淺✘•·,樣品在微孔區內傳質短·│₪☁•。這些對縮小譜頻寬度·✘▩、提高解析度是有益的·│₪☁•。根據柱效理論分析✘•·,基質粒度小✘•·,塔板理論數n就越大·│₪☁•。這也進一步證明基質粒度小✘•·,會提高解析度的道理·│₪☁•。 再者✘•·,高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60c✘•·,透過改善傳質速度✘•·,縮短分析時間✘•·,就可增加層析柱的效率·│₪☁•。

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